产品货号：
GS1580
中文名称：
重组EK蛋白酶(酵母)
英文名称：
Recombinant EK Protease, Yeast-derived
产品规格：
100U|500U
发货周期：
1～3天
产品价格：
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重组EK蛋白酶（rEK）是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶，不仅保持天然EK酶的功能活性，且在较广的温度范围内表现出更好的稳定性和特异性。
重组EK蛋白酶是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶，具有很强的位点特异性，严格识别五氨基酸序列DDDDK↓，切割位点在天冬氨酸和赖氨酸之间。普遍应用的五氨基酸序列为：Asp-Asp-Asp-Lys↓。
重组EK蛋白酶在pH7.4，23℃时可达到最佳活性，但在pH4.5～9.5和温度4～45℃的广泛范围内皆有活性，使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。另外rEK酶切后可利用其含有的His标签，通过Ni-NTA树脂去除，以达到纯化无标签蛋白的目的。
比活力：1U/μL
分子量：约40KD
来源：毕赤酵母
标签：His标签
纯度：＞95%（by SDS-PAGE）
状态：溶液
酶储存液：20mM Tris-HCl，pH7.4
保存：-20℃，有效期6个月，避免反复冻融，长期不用请置于-80℃可保存两年。
在1×rEK Buffer（250mM Tris-HCl,50mM NaCl,pH7.4,2.5mM CaCl2）中，23℃反应16h，剪切效率>90%的50μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
图1.SDS-PAGE分析，底物的用量为50μg，酶的用量依次为0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5U，反应前融合蛋白31.2kDa，23℃在1×rEK Buffer中反应16小时后的酶切产物为4.1kDa的His标签和27.1kDa的目的蛋白。
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重组EK蛋白酶是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶，具有很强的位点特异性，严格识别五氨基酸序列DDDDK↓，切割位点在天冬氨酸和赖氨酸之间。普遍应用的五氨基酸序列为：Asp-Asp-Asp-Lys↓。
重组EK蛋白酶在pH7.4，23℃时可达到最佳活性，但在pH4.5～9.5和温度4～45℃的广泛范围内皆有活性，使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。另外rEK酶切后可利用其含有的His标签，通过Ni-NTA树脂去除，以达到纯化无标签蛋白的目的。
比活力：1U/μL
分子量：约40KD
来源：毕赤酵母
标签：His标签
纯度：＞95%（by SDS-PAGE）
状态：溶液
酶储存液：20mM Tris-HCl，pH7.4
| 组分 | 100U | 500U |
| 重组EK蛋白酶 | 100μL | 500μL |
| 说明书 | 1份 | |
保存：-20℃，有效期6个月，避免反复冻融，长期不用请置于-80℃可保存两年。
在1×rEK Buffer（250mM Tris-HCl,50mM NaCl,pH7.4,2.5mM CaCl2）中，23℃反应16h，剪切效率>90%的50μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
- 在1×rEK Buffer（250mM Tris-HCl,50mM NaCl,pH7.4,2.5mM CaCl2）中，加入50μg融合蛋白和1μL rEK Protease。
- 在23℃恒温反应16小时后，取40μL上述反应液，置于单独的EP管中。
- 向上述EP管中加入10μL 5X SDS Loading Buffer，样品煮沸5min，取10μL进行SDS-PAGE分析（附图1）。
- 需要指出的是，有些蛋白需要在低温环境下展开实验，这时可以通过延长酶切作用时间或者增加EK酶的用量，来达到完全消化融合蛋白的目的，一般在不增加酶的用量的情况下，酶切过夜效果也是很好的。
图1.SDS-PAGE分析，底物的用量为50μg，酶的用量依次为0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5U，反应前融合蛋白31.2kDa，23℃在1×rEK Buffer中反应16小时后的酶切产物为4.1kDa的His标签和27.1kDa的目的蛋白。
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